96ウェルプレートの培養細胞からハイスループットqPCRサンプル調製 ～RNA精製はもう必要ありません！

培養細胞での遺伝子発現解析では、しばしば細胞数が限られていることが問題になることがあります。その理由としては、リアルタイムPCRでの解析を行うためのサンプル調製では、細胞の培養から回収をはじめとして複数の操作を行う必要があり、そのうち、特に細胞の回収とRNAの精製ステップが律速段階となっていました。RNA精製に旧来のフェノール/クロロフォルム抽出とエタノール沈殿を用いる方法や、カラムを使用する方法では手間も時間も要するため、多数のサンプルによる実験を行うことを難しくしていました。

今回ご紹介する技術資料では、ベルギーのゲント大学のDr. Jo Vandesompeleらによる、SingleShot SYBR Green Kitの評価実験の結果を示しています。このキットは、10個から最大100,000個の培養細胞から、RNA精製のステップなしにRT-qPCR用のサンプル調製を行うものです。

資料では、SH-EP, SK-N-AS, NGP, IMR-32といった複数種のNeuroblastoma細胞を96ウェルプレートに培養し、それらから正確で、かつ再現性の高い、RT-qPCRによる遺伝子発現解析が行えたことを示しています。

2回の独立した実験間での再現性

キットにはDNaseが含まれており、それを用いることで効果的にゲノムDNAが除去されます。
　図左：SingleShotキット　　　図右：他社製品

• Accurate and Reproducible RT-qPCR Gene Expression Analysis on Cell Culture Lysates Using the SingleShot? SYBRR Green Kit, Bulletin 6572　
• SingleShot製品シリーズは、Cell LysisからゲノムDNA消化までを行うキットから、1ステップのRT-qPCRを行うためのパッケージ、2ステップのRT-qPCRを行うためのパッケージもラインアップしています。プローブ法やSYBR Green法にも対応してます。
  製品紹介のPDFファイル
• SingleShot Cell Lysis Kitの製品紹介ページ