CRISPR/Cas-9でゲノム編集した細胞株樹立の迅速ワークフロー
このコーナーでは、定期的にバイオ・ラッドの新製品や技術情報のトピックをご紹介します。
ゲノム編集技術とは、部位特異的ヌクレアーゼを用いて標的遺伝子に自在に改変を導入できる技術です。CRISPR/Cas-9等を用いたゲノム編集ツールの開発と発展により、これまでの手法では非常に難しかったり、不可能でさえあった研究が出来るようになってきました。
この技術を用いることで、標的遺伝子のノックアウトをはじめとして、遺伝子活性化の抑制による遺伝子機能の研究、欠陥遺伝子の修正、または新しい機能の導入やゲノム遺伝子座の可視化などが可能となり、ライフサイエンス研究においては必要不可欠な技術となってきています。 また、医学・創薬においては病態解明だけでなく、 創薬スクリーニングや新しい遺伝子治療法の開発につながる非常に有用な技術として期待されています。
今回ご紹介する技術資料では、 CRISPR/Cas-9によりICAM-1(intercellular adhesion molecule-1)遺伝子のゲノム編集を行った後、セルソーティングによりトランスフォーム細胞の濃縮と細胞分離を行うことで、 効率よくゲノム編集細胞株を樹立しています。編集した細胞について、ウェスタンブロッティングおよび免疫組織染色によりICAM-1タンパク質の発現がないことを確認し、さらにその細胞を用いたダウンストリーム実験の事例をご紹介しています。
2. ゲノム編集した細胞の濃縮と単離
3.ゲノム編集の確認
4. 編集した細胞の機能解析
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