そのハウスキーピングタンパク質（HKP）、ローディングコントロールとしての評価をしていますか？

ハウスキーピングタンパク質（HKP）は、サンプル間で発現量が一定であると考えられているため、ウェスタンブロッティングにおいてローディングコントロールとして用いられます。
しかし、細胞死や細胞分化などにより、HKPの発現レベルが変化することが知られているため、いくつか種類のあるHKPから選択する時に、発現レベルが一定であることを確認、評価することが推奨されます。 本技術資料では、予備実験としてHKPの評価方法のプロトコールをご紹介しています。

評価方法の概要は以下の通りです。
ウェスタンブロッティングで比較したい検体（例：グループA） ごとに 、タンパク質抽出などの調製を独立して行ったサンプルをそれぞれ3つ以上 （例：サンプル A1, A2, A3） 用意します。
アプライ量の異なるゲルを2種類作成し、1枚のゲルはCBB染色による総タンパク質量の確認、もう1枚のゲルはウェスタンブロッティングにてHKPの検出により、シグナル強度が安定していることを確認します。

評価の結果、タンパク質の発現レベルが一定でない場合は、ローディングコントロールとして使用できません。
他のHKPに変更したり、総タンパク質補正の導入したりなど、再検討が必要です。

今回ご紹介した記事の全文はこちらからご覧いただけます。

ハウスキーピングタンパク質の発現量の確認　弊社の資料（英文PDFファイル）

バックナンバー：ウェスタンブロッティングのローディングコントロールで迷った時に

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