最適な転写バッファーを選ぶポイントとは？

ウェスタンブロッティングにおいて、ゲルからメンブレンに転写する工程は、実験の成否を左右する重要なステップとなります。しかし、タンパク質には分子量やアミノ酸組成の異なる様々な種類が存在するため、そのすべてをメンブレンに転写する万能な転写装置や転写バッファーというものは存在しません。汎用性の高い転写条件を適用すれば大多数のタンパク質を転写することはできますが、ターゲットとなるタンパク質によっては転写バッファーや転写電気条件の最適化が必要となることもあります。

セミドライ式やタンク式の転写装置で用いられる一般的な転写バッファーとして、Towbin バッファー( 25 mM トリス、192 mM グリシン、20% メタノール、pH 8.3)が知られています。この Towbin バッファーにもバリエーションがあり、少量の SDS を添加したり、メタノール濃度を変えたりしたバッファーが用いられることもあります。少量の SDSを添加することでゲルからのタンパク質の溶出が促進されますが、逆にメンブレンへの結合効率は低下してしまいます。逆にメタノール濃度を上げることでメンブレンへのタンパク質結合性は高められますが、ゲルからの溶出効率は低下してしまいます。

このように SDS とメタノールは互いに相反する効果があるため、一概に Towbin バッファーと言っても、目的に応じた組成かどうか注意が必要です。また、その他にも様々な用途の転写バッファーがありますが、詳細はApplications & Technologiesの資料サイトをご参照ください。

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