アフィニティー担体を使用しない中性/塩基性IgMの精製

IgMは、その構造や生化学特性のためにプロテインAやプロテインGに結合がしにくく、IgGよりも精製の検討が複雑になります。この技術資料では、陽イオン交換担体のNuvia SとCHT （セラミックハイドロキシアパタイト）TypeⅡを用いてIgMの精製を行っています。
陽イオン交換クロマトグラフィーでの精製は、中性/塩基性のIgMに適しており、3種類の異なるpI（pI 7以上）のIgMを使用してプロトコールの最適化を検討しています。

Fig.3とFig.4は、IgM-1 pI 7.5をサンプルとし、酢酸ナトリウムバッファーpH 5.0と酢酸ナトリウムバッファーpH 6.0をベースにNaClグラジェントで精製を行ったデータです。
非還元SDS-PAGEにて確認を行うと、pH 5.0のバッファーに比べてpH 6.0のバッファーを使用した方が、IgMのフラクションに含まれるトランスフェリン（TF）や血清アルブミン（SA）などの量が減少していることが分かります。

イオン交換樹脂によるIgMの精製

(左)Fig.3 Nuvia S,バッファーpH5.0での精製 (右)Fig.4 Nuvia S,バッファーpH6.0での精製

この技術資料は、大量のサンプルを精製することを想定して2工程（Nuvia S - CHT）で行っていますが、さらにサイズ排除クロマトグラフィー（SEC）などの工程を追加して精製度を高めることも可能です。